吐逆毒素也称为脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON),是由串珠镰刀菌、轮状镰刀菌以及多育镰刀菌等爆发的真菌毒素,大多保存于粮谷、饲料及其制品中。中毒后影响消化系统和神经系统,主要体现为吐逆、头痛、头晕、腹痛、腹泻等症状。我国标准划定:玉米、大麦、小麦及其制品中吐逆毒素不得凌驾1mg/kg,猪、犊牛、泌乳期动物配合饲料中吐逆毒素不得凌驾1mg/kg,牛、家禽配合饲料中吐逆毒素不得凌驾5mg/kg。
原理
测定的基础是抗原-抗体反应。微孔板上包被有抗抗体。加入吐逆毒素(DON)标准品或样品、酶标抗原和抗体后,游离的吐逆毒素与酶标抗原竞争团结抗体,抗体或抗体团结物与牢靠在微孔板上的抗抗体再团结,没有团结的标准品、酶标抗原及抗体被洗去,加入TMB底物显蓝色,加入终止液后颜色由蓝变黄,用酶标仪在450nm处检测,吸光值与样品中吐逆毒素含量成负相关,与标准曲线较量即可得出吐逆毒素的含量。
注重事项
室温低于20℃或试剂及样品未回到室温(20- 25℃)会导致数值偏低。
在洗板历程中若是泛起板孔干燥过久的情形,则会泛起标准曲线不可线性,重复性欠好的征象。以是洗板排干后应连忙举行下一步操作。
标准物质和显色液对光敏感,阻止直接袒露在光线下。
混淆要匀称,洗板要*(包括加样品和标准液的时间都必需充分混淆匀称)。
终止液为强酸性物质,阻止接触皮肤。
不要使用过了有用期的试剂盒,也不要混淆使用差别批次的试剂盒,这样会引起测定效果禁绝确。
试剂盒的贮存条件是2-8℃,切勿冷冻。